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已知一个物种的基因组怎么克隆目的基因

更新:02-23 整理:39baobao.com
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这个呢一般的做法就是首先构建基因文库或者cDNA文库, 基因文库和cDNA文库建立起来后,下一步的工作是从一个庞大的基因库中分离出所需要的重组体克隆,这是一件难度很大,费时费力的工作。一种方法是根据重组体某种特征从库中直接挑选出重组体,这种方法叫做“选择”;另一种方法是把库中所有的重组体进行一遍筛查,这种方法叫做“筛选”。

1.原位杂交法:这一种利用特异探针的直接选择法,是一种十分灵敏而且快速的方法,用于杂交的探针可以是双链DNA,也可以是单链DNA,或是RNA。杂交的检测常用放射性同位素标记探针,通过自显影来进行。显然,有效进行杂交筛选的关键是获得特异的探针。探针的获得有如下方法:

①如果目的基因序列是已知的,或部分序列是已知的,探针可以从已有的克隆中制备,或用PCR方法扩增。

②如果目的基因是未知的,而有其他物种的同源序列,那么可以用同源序列做探针。

③如果目的基因未知,

但知道它对应的蛋白质序列,

可根据蛋白质序列设计相应的核酸探针。

2.扣除杂交法:这是一种筛选方法,难度很大,是面对目的基因未知,同源基因未知,蛋白质序列未知的情况的。基本原理是找到该基因的高表达细胞,提取相应的mRNA,并与一般细胞提取的mRNA进行比较,分离一般细胞不存在而高表达细胞存在的mRNA,然后用该mRNA逆转录生成cDNA。

另外,若目的基因已知的话,简单的PCR扩增就行了。

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