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无菌操作法，是整个过程控制在无菌条件下进行的一种操作方法。某些药品加热灭菌后发生变质、变色或降低含量者可采用无菌操作法制备。此种无菌操作，不仅用于注射剂而且对其它的如滴眼剂、海棉剂等用于粘膜和创伤的制剂也均适用。无菌操作室或无菌操作所用的一切用具、材料以及环境，均须应用面所述灭菌法灭菌，操作须在无菌操作室或无操作柜内进行。
（一）无菌操作的空气灭菌可应用上节《气体灭菌法》中所述的甲醛、丙二醇、乳酸、三甘醇等。其具体用法不再赘述。药厂大型无菌操作，常用甲醛溶液加热熏蒸进行空气灭菌。将甲醛溶液放入瓶内，逐渐被吸收蒸气夹层加热锅中，甲醛溶液被加热，甲醛蒸气经气出口送入总进风道，由鼓风机吹入无菌操作室，连续3小时后，一般即可将鼓风机关闭。室温应保持25℃以上，以免室温过低甲醛蒸氯了聚合而附着于冷表面，湿度应保持60％以上，密闭熏蒸12－24小时以后，再将25％氨水加热（每m3用8－10ml），从总风道送入氨气约15分钟，以吸收甲醛蒸气，然后开启总出口排风，并通入经处理过的无菌空气直到室内无臭气为止。
除用上述方法定期进行较彻底的灭菌外，还要对室内的空间、用具（桌椅等）、地面、墙壁等，用3％酚溶液、2％煤酚皂溶液、0.2%新洁而或75％酒精喷洒或擦试。
其它用具尽量用热压灭菌法或干热灭菌法灭菌。每天工作前开启外线一小时，中午休息时间也要开1／2－1小时。
（二）无菌操作操作人员进入操作之前要洗澡并换上已经灭菌的工作服和清洁的鞋子，不使头发、内衣等露出来，以免造成污染机会。安瓿要150－180℃2－3小时干热灭菌。橡皮塞要以121℃1小时热压灭菌。有关器具、机器都要经过灭菌。用无菌操作法制备的注射剂， 大多要加入抑制。
小量无菌制剂的制备，也可在无菌操作柜中进行。无菌操作柜分小型无菌操作与联合无菌无操作两种小型无菌操作柜又称单人无菌柜。式样有单面式与双面式两种。操作柜的架子用木制，四周配以玻璃，前面操作下装木板，挖二圆孔，孔内密接橡皮手套或袖套。药品及用具等，由侧门送入柜内后关闭。操作时可完全与外界空气隔绝。柜内空气的灭菌，可在柜中央上方装一小型紫外线灯，使用前1小时启灯灭菌，或用药液（如3％酚溶液）喷雾灭菌。联合无菌操作柜是由几个小型操作柜联合制成，以使原料的精制，传递分装及成品暂时存放等工作全部在柜内进行。近年来，采用层流洁净工作台作无菌操作，使用方便，效果可靠
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